Tehnici de blotting

Blottingul este o tehnic? de diagnostic genetic folosit? pentru testarea bolilor genetice, buy discount expresiei anumitor gene sau pentru depistarea unor antigene sau anticorpi.

Tehnicile de blotting pot detecta și evidenția cu înaltă specificitate proteine, ADN sau ARN. Există 4 tipuri principale de blot:

  • Sounthern Blot – pentru analiza ADN (identificarea anumitor gene)
  • Northern Blot – pentru analiza ARN (măsurarea lungimii și cantității de ARNm, care reflectă expresia genică)
  • Western Blot – pentru analiza proteinelor (măsurarea cantității de antigen sau anticorp)
  • Dot Blot (slot) – pentru ADN, ARN sau proteine (nu necesită electroforeză)

Cum se efectuează blotul?

Întrucât molecula de ADN are dimensiuni mari și nu poate fi analizată direct, ea este inițial supusă acțiunii unor enzime de restricție (endonucleaze de restricție) din care rezultă fragmente mai mici de ADN. Molecula de ARN și proteinele au dimensiuni mai mici și pot fi analizate direct.

Într-o primă etapă, numită electroforeză în gel, molecula de analizat (ADN, ARN, proteină) este pusă într-un câmp electric, unde migrează în funcție de sarcina electrică (acizii nucleici și majoritatea proteinelor fiind negative, se vor regăsi spre catod) și dimensiune (număr de kilobaze). Se face apoi transferul pe o membrană de nitroceluloză și se adaugă proba marcată radioactiv pentru evidențierea benzilor de interes. În această etapă, proba sintetizată complementar secvenței genice de interes va hibridiza cu secvența omoloagă. Ulterior, se îndepărtează excesul de probe nelegate iar perechile probă-benzi reactive de ADN pot fi vizualizate prin autoradiografie.

foto: cancer.gov

Add comment


Security code
Refresh

Ultimele comentarii